معلومة

تحضير الحمض النووي للتسلسل


في طريقة تسلسل البندقية أو بعض الطرق ذات الصلة ، يتم تقسيم الحمض النووي إلى جزء عشوائي. يتم إدخال القطعة التي يبلغ حجمها حوالي 3 كيلو بايت في البلازميد بواسطة إنزيم يجاز ثم يتحول البلازميد إلى الإشريكية القولونية باستخدام جهاز كهربائي. كما أفهم ، الهدف هو تضخيم الجزء ليكون التسلسل.

لدي سؤال في هذا الوقت:

  • بعد نمو بكتيريا e.coli ، لدينا عدد كبير جدًا من أنواع مختلفة من خيوط الحمض النووي المتنوعة بنفس الحجم في المستعمرة. كيف يتم تنقية نوع من الشظية ليتم تسلسلها؟

على سبيل المثال ، لدي 20.000 خيط DNA مختلف بنفس الحجم 3 كيلوبايت بعد تقسيمه إلى جزء عشوائي:

- AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ... AAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTTT - (3 كيلوبايت جزء من الكروموسوم 1)

- GGGGXXXXXAAAAAAAAAAA ... AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA - (3 كيلوبايت جزء من الكروموسوم 2)

- 19998 بقي جزء من الحمض النووي ... - (3 كيلوبايت جزء من كروموسوم عشوائي)

بعد تضخيمها لدي:

1000000x من - AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA… AAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTTT -

1000000x من - GGGGXXXXXAAAAAAAAAAA ... AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA -

1000000x من - 19998 جزء من الحمض النووي اليسار ... -

يتم خلط خيوط الحمض النووي هذه معًا في مستعمرة. لا يمكننا تشغيل تسلسلها معًا على أنها مختلطة ، فكيف نحصل على التسلسل الوحيد للتسلسل:

1000000x من - AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA ... AAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTTT -


آمل أن أكون قد فهمت سؤالك بشكل صحيح.

أعتقد أن ما تفتقده هو أنه بعد أن تقوم بتفكيك الحمض النووي ، فإنك تخفف التركيز بحيث تشتمل كل بكتيريا على جزيء DNA واحد. بعد ذلك ، تقوم بتخفيف البكتيريا الموجودة على طبق ونشرها بحيث تكون كل بكتيريا بعيدة عن البكتيريا الأخرى. أخيرًا ، بعد نموها تحصل على مستعمرة واحدة متطابقة وراثيًا لكل جزء من الحمض النووي.


شاهد الفيديو: ما هو الحمض النووي DNA وكيف يعمل شرح بسيط وعلمي (كانون الثاني 2022).